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影响兔ELISA试剂盒实验的因素

  • 更新时间:2023-08-25      浏览次数:544
    •   兔ELISA试剂盒主要由包括试剂盒盒体、酶标板、标准品、样品、懈氏试剂、缓冲液、洗涤液、显色剂和停止剂等组成。试剂盒的盒体上标有试剂盒编号、试剂名称、制造商等基本信息,用于方便用户识别和区分不同试剂盒。
       
        酶标板是试剂盒中的核心部件,通常采用96孔板的形式,每一孔都涂有特定的抗原、抗体或其它蛋白质。标准品是与待检样品相同或类似的蛋白质,用来检测和定量待测样品中的抗体或抗原。样品是待测标本,可以是免疫学实验室中的兔血清,也可以是其它液体、组织、细胞等。
       
        免疫酶标法的原理是将待测样品加到涂有抗原或抗体的酶标板中,通过特异性反应将待测物质捕获在酶标板上;然后加入可与待测物质结合的标记物,如酶、金标等,使其与被捕获的物质产生特异性结合;加入显色底物如TMB,用于检测标记物的酶活性,产生颜色变化。液体样品从血浆、血清或其它生物样品中分离出来,加到酶标板中,与涂有同种或异种来源的抗原或抗体结合,用酶标法检测其是否含有特异性免疫球蛋白、抗体等。
       
        在试剂盒中,常用的酶标法包括直接法、间接法、竞争法、夹心法等。在直接法中,样品直接与定量抗原或抗体反应;在间接法中,用兔血清中特异性抗体与抗原反应,然后用特异性标记分子如HRP等检验抗原特异性的抗体;在竞争法中,添加适当浓度的特异性抗体、酶标记的抗原及待测物竞争反应,以判断待测物在样品中的存在量;在夹心法中,兔抗体与特定抗原反应后,用兔抗体和酶标记的抗兔IgG标记。
       
        兔ELISA试剂盒实验的结果受操作影响很大,每个步骤包括加样,温育,洗涤,显色,酶标仪读数均应认真负责才能充分发挥ELISA的高灵敏,强特异的优点。我们技术人员通过几年的实验观察,认为影响ELISA实验的因素有如下三方面。
       
        一、、抗原、抗体活性对效价的影响:
       
        主要是试剂中抗体(或抗原)的效价降低或失活,结果不易判断。再有ELISA试剂盒灵敏度高,对杂质的反应灵敏度也高,实验中空白对照OD值偏高或假阳性;酶结合物浓度过高,也会导致OD值假性增高。试剂保存不当或活性下降;试剂盒灵敏度高。
       
        二、、试验仪器:
       
        1、加样器是否经过校正,酶免测定血清用血量很少,如手工加样器的性能不好,吸取样品不,会使结果忽高忽低。
       
        2、实验器具被污染;酶标滴加在孔壁上,洗板未洗净;混用洗液或洗液稀释错误;洗液瓶中、管道或配置洗液的水中有霉菌;读数时酶标板底部有水蒸气凝结;洗液瓶、废液瓶混用;读数过程中板孔中有气泡;酶标仪偏差均可引起假阳性结果。
       
        三、操作:
       
        1、检测前先将兔ELISA试剂盒从冰箱取出置室温平衡20min后使用,试剂用完及时放回冰箱冷藏,以免造成试验结果假性降低;孵育温度过低;
       
        2、抗原与抗体反应达到平衡,依赖于温度与时间。温度高于45℃易引起失活及标记物脱落,温度低于4℃,影响反应速度。
       
        3、加入标本后未进行必要的混匀;标本稀释错误;加样量不正确;冷冻标本未溶解混匀;标本中含有防腐剂均可引起阳性对照读数不正常。
       
        简而言之,由于兔ELISA试剂盒实验的影响因素较多,在实际工作中操作规范、仔细,避免和排除各种因素的影响,使之得到准确可靠的检验结果。
       

      兔ELISA试剂盒