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大鼠低氧诱导因子1αelisa试剂盒的正确使用步骤分享

  • 更新时间:2025-02-24      浏览次数:121
    •   大鼠低氧诱导因子1αelisa试剂盒采用ELISA技术,通过双抗体夹心法或竞争法,利用纯化的抗体包被微孔板,与待测样品中的HIF-1α特异性结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,再经过洗涤、显色和终止反应等步骤,通过酶标仪测定吸光度来计算样品中HIF-1α的浓度。
       
        为确保实验结果的准确性,正确使用大鼠低氧诱导因子1αelisa试剂盒至关重要。以下是详细的使用步骤:
       

       

        一、实验前准备
       
        1、试剂盒检查:确认试剂盒包含标准品、检测抗体、酶结合物、底物、终止液、洗涤液等,并检查是否在有效期内。
       
        2、样本准备:采集大鼠组织或细胞样本,按要求处理(如匀浆、离心)并保存于-80°C。
       
        3、试剂平衡:将试剂盒从冰箱取出,室温平衡30分钟。
       
        4、仪器准备:确保酶标仪、移液器、离心机等设备正常工作。
       
        二、实验步骤
       
        1、标准品稀释:按说明书将标准品梯度稀释,通常设置6-8个浓度点。
       
        2、加样:将标准品和样本加入酶标板孔中,每孔100μL,设置空白对照。
       
        3、孵育:37°C孵育1-2小时,使HIF-1α与包被抗体结合。
       
        4、洗涤:弃去孔内液体,加入洗涤液,静置30秒后弃去,重复3-5次。
       
        5、加检测抗体:每孔加入100μL生物素标记的检测抗体,37°C孵育1小时。
       
        6、洗涤:重复洗涤步骤。
       
        7、加酶结合物:每孔加入100μL酶结合物,37°C孵育30分钟。
       
        8、洗涤:再次洗涤。
       
        9、加底物:每孔加入100μL底物溶液,避光孵育15-30分钟。
       
        10、终止反应:每孔加入50μL终止液,颜色由蓝变黄。
       
        11、读数:用酶标仪在450nm波长下测定吸光度。
       
        三、数据分析
       
        1、绘制标准曲线:以标准品浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。
       
        2、计算样本浓度:根据标准曲线计算样本中HIF-1α的浓度。
       
        四、注意事项
       
        1、操作规范:避免污染,使用一次性吸头。
       
        2、时间控制:严格控制孵育和洗涤时间。
       
        3、仪器校准:确保酶标仪和移液器准确。
       
        4、重复实验:每个样本至少做3次重复,确保结果可靠。